Inmunonefelometría
La inmunonefelometría es una técnica que basa en la formación de complejos antígeno-anticuerpo en suspensión. Los inmunocomplejos presentes bloquearán parte de la luz, absorben otra parte y dispersan el resto en múltiples direcciones.
El equipo emite un haz de luz que intenta pasar a través de la muestra. Los inmunocomplejos presentes actúan como pequeñas partículas que desvían y dispersan la luz en varios ángulos.
El equipo sitúa el detector lateralmente (generalmente entre 30° y 70° respecto al haz principal), para captar la luz dispersada.
Cuanta más luz sea dispersada hacia el detector, mayor es la concentración del analito.
Este método permite detectar cantidades muy bajas de proteínas porque la dispersión de luz es un fenómeno altamente sensible, incluso cuando la turbidez aún no es visible.
Aplicaciones
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Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgM).
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Medición de proteínas del complemento (C3, C4).
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Detección de cadenas ligeras libres.
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Otras proteínas séricas utilizadas en inmunología clínica.
Aunque es más sensible que la turbidimetría, requiere equipos especializados y muestras visualmente claras para evitar interferencias.
PROTOCOLO
Preparación de la muestra: se obtiene suero o plasma limpio y libre de interferencias.
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Reacción con anticuerpos: la muestra se mezcla con reactivos que contienen anticuerpos específicos, generando inmunocomplejos en suspensión.
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Calibración del nefelómetro: se utilizan estándares y controles para ajustar el equipo.
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Carga de la mezcla: la muestra ya preparada se coloca en el nefelómetro.
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Iluminación y detección: el equipo ilumina la muestra y mide la luz dispersada lateralmente por los inmunocomplejos.
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Cuantificación: la señal obtenida se compara automáticamente con la curva estándar del equipo para determinar la concentración del analito.
LECTURA DE RESULTADOS
La nefelometría mide la luz dispersada por los inmunocomplejos.
- Una baja dispersión indica pocos complejos y baja concentración del analito, lo que suele ser un resultado negativo.
- Una alta dispersión indica muchos complejos y alta concentración, resultando positivo.
La señal se compara con una curva estándar para calcular la concentración exacta.